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BCECF,AM是一种广泛使用的检测细胞质pH值的荧光探针。具有细胞膜渗透性，进入细胞后被胞内酯酶水解生成BCECF，一种极性荧光衍生物从而被保留在细胞内。BCECF在细胞内很稳定，排出半衰期超过2小时。胞内pH测定通过比率成像实现，通过确定pH依赖性的发射光强度比率（Ex=535nm），分别用490nm激发光激发和440nm激发光激发，使用荧光分光光度法（spectrofluorometry）或流式细胞仪检测皆可。

BCECF,AM虽然主要用于哺乳动物细胞，也有报道用于植物细胞、细菌和酵母等的细胞pH水平检测。BCECF,AM还被广泛用于各种功能实验，如细胞活力和毒性、凋亡、粘附、趋化、药物抗性等引起的细胞pH变化检测。BCECF,AM还能用于包括钾离子在内的其他离子的胞内变化检测。

CAS号	117464-70-7
化学名	3',6'-bis(acetyloxy)-5(or 6)-[[(acetyloxy)methoxy]carbonyl]-3-oxo-spiro[isobenzofuran-1(3H),9'- [9H]xanthene]-2',7'-dipropanoic acid,2',7'-bis[(acetyloxy)methyl] ester
同义名	BCECF Acetoxymethyl ester;2',7'-Bis-(2-Carboxyethyl)-5-(and-6)-Carboxyfluorescein,Acetoxymethyl Ester;
分子式	C39H36O19
分子量	808.69
纯度	≥95%
外观	类白色至白色或浅黄色至暗黄色固体
溶解性	溶于乙腈、DMSO、DMF
结构式

• 储存液制备
  实验前将低温保存的BCECF,AM置于室温回温至少20min。用高质量的无水DMSO溶解粉末，使其充分溶解，配制成1～10mM储存液。按照单次用量分装后置于≤-20℃避光干燥保存，六个月稳定。
  
  • 用水溶性缓冲液或培养基稀释储存液到需要浓度的工作液，现配现用，不可保存。正常的BCECF,AM溶液无色且无荧光（浅色和弱荧光可接受）。
  
  
• BCECF,AM的加载（哺乳动物细胞）
  大多数哺乳动物细胞不需透化，直接用稀释的细胞膜渗透BCECF,AM探针孵育即可加载。一旦进入细胞，非特异酯酶水解非荧光AM前体，产生荧光且pH灵敏的探针。阳离子探针BCECF的低泄露率和小的细胞内体积使得探针在胞内的终浓度明显高于胞外孵育浓度。总体而言，与钙离子探针比如Fura-2相比，以AM形式加载的BCECF更少出现胞内区域化。大量的实验数据表明BCECF在细胞质内是自由流动和解离的。